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IMR-90人胚肺成纖維細胞培養步驟及處理方法

更新時(shí)間:2021-09-07      點(diǎn)擊次數:1876
   培養步驟:
  1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加4-6mL*培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過(guò)夜(或將細胞懸液加入6cm皿中),培養過(guò)夜。第二天換液并檢查細胞密度。
  2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養。
  1、對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
  1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
  2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加5ml以上含10%血清的*培養基終止消化。
  3.輕輕吹打細胞,*脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
  4. 按5-6ml/瓶補加培養液,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含5-6 ml培養液的新皿中或者瓶中。
  PS:若客戶(hù)收到2ml小管細胞,收到細胞后,用75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超凈臺或安全柜內,嚴格無(wú)菌操作;將小管細胞轉移至T25培養瓶或6cm培養皿,加入5ml左右*培養基混勻,放入培養箱過(guò)夜培養后查看細胞密度:若密度未超過(guò)80%,換液繼續培養,視情況傳代或者凍存。若密度超過(guò)80%,可直接進(jìn)行傳代(方法同上)。
  2、對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
  方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
  方法二:可選擇半數換液方式,棄去半數培養基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
  3)細胞凍存:待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細胞凍存。貼壁細胞凍存時(shí),棄去培養基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,進(jìn)行離心收集,1000RPM條件下離心8-10分鐘,去除上清,按凍存數量加入血清及DMSO,凍存比例為90%FBS+10%DMSO。
  PS:若客戶(hù)收到2ml小管細胞,收到細胞后,用75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超凈臺或安全柜內,嚴格無(wú)菌操作;將小管細胞轉移至T25培養瓶或6cm培養皿,加入5ml左右*培養基混勻,放入培養箱過(guò)夜培養后查看細胞密度:若密度未超過(guò)80%,換液繼續培養,視情況傳代或者凍存。若密度超過(guò)80%,可直接進(jìn)行傳代(方法同上)。
  處理方法:
  1. 收到細胞先不開(kāi)瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養箱靜置若干小時(shí)(視細胞密度而定)穩定細胞狀態(tài)。接著(zhù)在倒置顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況,并對細胞進(jìn)行不同倍數拍照(建議收細胞時(shí)就整體外觀(guān)拍一張照片,觀(guān)察培養基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài),100×,200×各一張),觀(guān)察記錄細胞在運輸過(guò)程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行售后的依據。
  2. 收到細胞未開(kāi)封,出現污染狀況我們負責免費重發(fā)一次細胞。
  3. 由于細胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸等多方面因素的影響,故本公司只保證客戶(hù)收到細胞后一周內的細胞狀態(tài),故客戶(hù)需要售后是需出示收到細胞的時(shí)間證明及客戶(hù)提供收貨時(shí)間和發(fā)現問(wèn)題后與客服人員溝通的時(shí)間證明,期間間隔時(shí)間不能大于7天。
  4. 如客戶(hù)對細胞的種類(lèi)、純度、活性等特性有疑問(wèn),需提供相應的生物學(xué)實(shí)驗檢測結果作為依據。
  備注:各位老師收到后用無(wú)菌離心管收集瓶中培養基,留作過(guò)渡培養
        以上僅供參考,希望對您有所幫助!
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